Ocena zielonego wskaźnika laserowego do cytometrii przepływowej.

  • Cytometry przepływowe zazwyczaj zawierają drogie lasery o wysokiej jakości (TEM00) strukturze wiązki wyjściowej i bardzo stabilnej mocy wyjściowej, co znacznie zwiększa koszt systemu i wymagania dotyczące mocy. Lasery z czerwoną diodą minimalizują zużycie energii i koszty, ale ograniczają wybór fluoroforów.
  • Niedrogie moduły wskaźników laserowych DPSS mogłyby oferować większy wybór długości fali, ale przypuszczalna niestabilność emisji ograniczyła ich zastosowanie. Moduł wskaźnika laserowego DPSS 532 nm o wartości 160 USD został najpierw oceniony pod kątem charakterystyki szumu, a następnie wykorzystany jako źródło światła wzbudzającego w wykonanym na zamówienie cytometrze przepływowym do analizy  kalibracji fluorescencyjnej  i wyrównania mikrosfer.
  • Osiem z dziesięciu testowanych modułów było bardzo cichych (szum RMS < lub = 0,6% w zakresie od 0 do 5 MHz). Dzięki cichemu modułowi wskaźnika laserowego jako źródłu światła w systemie o wolnym przepływie, pomiary fluorescencji z mikrosfer wyrównujących dały CV na poziomie około 3,3%.
  • Co więcej, zastosowanie wydłużonych czasów przejścia i < lub =1 mW mocy lasera dało zarówno podstawową rozdzielczość wszystkich 8 pików w zestawie  mikrosfer Rainbow  , jak i granicę wykrywalności <20 cząsteczek fikoerytryny na  cząstkę . Dane zebrane przy czasie przejścia skróconym do 25 mikronów (w tym samym urządzeniu, ale przy mocy lasera 2,4 mW) wykazały granicę wykrywalności około 75 cząsteczek fikoerytryny i CV około 2,7%.
  • Wydajność, koszt, rozmiar i pobór mocy testowanego modułu wskaźnika laserowego sugerują, że może on nadawać się do zastosowania w konwencjonalnej cytometrii przepływowej, zwłaszcza jeśli został połączony z cytometrami obsługującymi wydłużony czas przejścia.

Submikrometrowa precyzja, trójwymiarowe (3D) ogniskowanie hydrodynamiczne poprzez „dryf mikroprzepływowy”.

  • W tym artykule zademonstrujemy jednowarstwowe, oparte na „mikrocieczowym dryfowaniu” trójwymiarowe (3D) urządzenia do hydrodynamicznego ogniskowania z  pozycjonowaniem ogniskowym cząstki /komórki zbliżoną do submikronowej precyzji zarówno wzdłuż kierunku bocznego, jak i pionowego.
  • Dzięki systematycznej optymalizacji geometrii kanałów i szybkości przepływu próbki/osłony, projektuje się i wytwarza serię urządzeń do hydrodynamicznego ogniskowania 3D opartych na „mikrocieczowym dryfowaniu” o różnych kątach krzywizny.
  • Ich wydajność jest następnie oceniana przy użyciu mikroskopii konfokalnej, szybkiego obrazowania kamerą i technik obrazowania z boku. Używając urządzenia o kącie krzywizny 180°, osiągnęliśmy odchylenie standardowe ±0,45 μm w  ogniskowej cząstki  i współczynnik zmienności (CV) 2,37% w pomiarach cytometrii przepływowej.
  • Według naszej najlepszej wiedzy jest to najlepsze CV, jakie udało się osiągnąć przy użyciu urządzenia do mikroprzepływowej cytometrii przepływowej. Co więcej, urządzenie wykazało zdolność do rozróżniania 8 pików po poddaniu go rygorystycznemu  testowi kalibracji 8 pików tęczy   , co oznacza zdolność do wykonywania czułych, dokładnych testów podobnych do komercyjnych cytometrów przepływowych.
  • Dalej przetestowaliśmy i zwalidowaliśmy nasze urządzenie, wykrywając komórki HEK-293. Dzięki zaletom prostego wytwarzania (tj. urządzenie jednowarstwowe), precyzyjnemu hydrodynamicznemu ogniskowaniu 3D (tj. submikrometrowej precyzji wzdłuż kierunku bocznego i pionowego) oraz wysokiej rozdzielczości wykrywania (tj. niskie CV), nasza metoda może służyć jako ważna podstawa wysokowydajnej, masowej produkcji mikroprzepływowej cytometrii przepływowej.

Analizy immunologiczne krwi pełnej za pomocą chipa cytometrii przepływowej opartej na dryfowaniu mikroprzepływowym.

Opłacalne, wysokowydajne instrumenty diagnostyczne mają kluczowe znaczenie dla zapewnienia społeczeństwu dostępnej, przystępnej cenowo i wysokiej jakości opieki zdrowotnej.

Tutaj przedstawiamy zintegrowany chip do cytometrii przepływowej oparty na „mikrocieczowym dryfowaniu”, jako potencjalnie niedrogie, szybkie i niezawodne narzędzie diagnostyczne. Jest w stanie analizować ludzką krew pod kątem liczenia komórek i diagnozowania chorób. Nasze urządzenie osiąga przepustowość ~3754 zdarzeń/s. Kalibracja za pomocą kulek kalibracyjnych  Flow-Check   wykazała dobrą zgodność z dostępnym w handlu laboratoryjnym cytometrem przepływowym.

Co więcej, poddanie rygorystycznemu testowi kalibracyjnemu na cząstkach 8-szczytowej  tęczy   wykazało jego zdolność do przeprowadzania badań immunologicznych o wysokiej rozdzielczości z rozdzielczością rozdziału 4,28 między dwiema najsłabszymi populacjami fluorescencyjnymi.  Dokładność zliczania przy różnych stężeniach kulek polistyrenowych wykazała silną korelację (r=0,9991) z wynikami hemocytometru.

Na koniec zademonstrowano wiarygodną ocenę ilościową komórek CD4+ w zdrowej ludzkiej krwi poprzez barwienie przeciwciałami monoklonalnymi. Wyniki te pokazują potencjał naszego mikroukładu do mikroprzepływowej cytometrii przepływowej jako niedrogiego, ale wydajnego urządzenia przyłóżkowego do medycyny mobilnej.

Komentarze na temat standardowych procedur operacyjnych EuroFlow dotyczących konfiguracji i kompensacji instrumentów dla instrumentów do tekstów BD FACS canto II, Navios i BD FACS.

  1. Niniejszy komentarz omawia specyfikę zastosowania standaryzacji EuroFlow analiz cytometrii przepływowej na trzech różnych cytometrach przepływowych. Konsorcjum EuroFlow opracowało w pełni ustandaryzowane podejście do immunofenotypowania cytometrii przepływowej nowotworów hematologicznych i pierwotnych niedoborów odporności.
  2. Standaryzowany zestaw narzędzi jest istotną częścią standaryzacji EuroFlow. Początkowo konsorcjum EuroFlow opracowało i zoptymalizowało krok po kroku standardową procedurę operacyjną (SOP) w celu skonfigurowania 8-kolorowego cytometru przepływowego BD FACSCanto II (Canto), z późniejszym włączeniem Navios (Beckman Coulter) i BD FACSLyric (Lyric) .
  3. Te SOP zostały opracowane, aby umożliwić standaryzowane i w pełni porównywalne pomiary fluorescencji w trzech cytometrach przepływowych. W Canto i Navios średnia intensywność fluorescencji (MFI) referencyjnego piku cząstek kalibracyjnych  kulek  Rainbow  jest wykorzystywana do ustawiania napięć fotopowielacza (PMT) dla każdego kanału detektora w poszczególnych instrumentach, aby osiągnąć ten sam MFI w różnych instrumentach.
  4. Z kolei nowa funkcja instrumentów Lyric umożliwia udostępnianie zbioru atrybutów, które są używane do umieszczania populacji pozytywnej na tej samej pozycji wśród instrumentów w postaci testów, jako jeden z jego elementów zintegrowanych w Cytometer Setup and Tracking (CS&T). moduł.
  5. Testy EuroFlow Lyric pozwalają zatem na znormalizowaną akwizycję 8-kolorowych paneli EuroFlow w Lyric bez konieczności ręcznego ustawiania napięć PMT na poszczególnych instrumentach.
  6. Podsumowując, znormalizowana konfiguracja przyrządu opracowana przez EuroFlow umożliwia międzyplatformową standaryzację pomiarów cytometrii przepływowej między i wewnątrzlaboratoryjnymi.
  7. Ten komentarz przedstawia perspektywę modyfikacji standardowego zestawu instrumentów EuroFlow dla instrumentów Canto, Navios i Lyric, które są szczegółowo opisane w poszczególnych SOP dla poszczególnych instrumentów dostępnych na stronie internetowej EuroFlow.

Obliczanie rozpraszania w polu dalekim od  cząstek niesferycznych  przy użyciu podejścia optyki geometrycznej.

Metoda numeryczna została opracowana przy użyciu optyki geometrycznej do przewidywania rozpraszania optycznego w dalekim polu od cząstek  symetrycznych względem osi optycznej. Składowa dyfrakcyjna rozpraszania jest obliczana i łączona ze składnikami odblaskowymi i refrakcyjnymi w celu uzyskania całkowitego wzoru rozpraszania. Obliczane są również terminy fazowe światła rozproszonego. Weryfikację metody osiągnięto poprzez założenie  cząstki sferycznej  i porównanie wyników z teorią rozpraszania Mie.

Rainbow Calibration Particles

RCP-20-5 Spherotech 5 mL 352.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-30-20A Spherotech 20X1 mL 1077.6 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-30-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-30-5A Spherotech 5X1 mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-30-5A-(EUROFLOW) Spherotech 5 (EUROFLOW) mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-32-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-35-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-60-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Particles

RCP-70-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow QC Calibration Particles

RQC-30-5 Spherotech 5 mL 656.4 EUR

Supra Rainbow Calibration Particles

SRCP-35-2 Spherotech 2 mL 376.8 EUR

Rainbow Linear Calibration Particles

RLP-30-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Calibration Kit

RCK-3K Spherotech mL 712.8 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-100-5 Spherotech 5 mL 237.6 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-150-5 Spherotech 5 mL 237.6 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-20-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-200-5 Spherotech 5 mL 237.6 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-30-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-300-5 Spherotech 5 mL 237.6 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-32-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-35-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-50-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-60-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Blank Calibration Particles

BCP-70-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

Yellow Calibration Particles

YCP-70-5 Spherotech 5 mL 388.8 EUR

Fluorescent Calibration Particles

FCP-34800-6K Spherotech 6x1 mL 372 EUR

Fluorescent Calibration Particles

FCP-3580-2 Spherotech 2 mL 352.8 EUR

Fluorescent Calibration Particles

FCP-7052-5 Spherotech 5 mL 358.8 EUR

UltraRainbow Calibration Particles

URCP-100-2 Spherotech 2 mL 372 EUR

UltraRainbow Calibration Particles

URCP01-30-10K Spherotech 10X1 mL 511.2 EUR

Drop Delay Calibration Particles

DDCP-70-2 Spherotech 2 mL 339.6 EUR

Drop Delay Calibration Particles

DDCP-70-20 Spherotech 20 mL 2301.6 EUR

Allophycocyanin Calibration Particles Kit

ACP-30-5K Spherotech 5X1mL 364.8 EUR

Rainbow Alignment Particles

RAP-38-5 Spherotech 5 mL 249.6 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-100-2 Spherotech 2 mL 310.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-20-5 Spherotech 5 mL 352.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-30-5 Spherotech 5 mL 364.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-30-5A Spherotech 5X1 mL 364.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-35-5 Spherotech 5 mL 364.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-38-5 Spherotech 5 mL 188.4 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-50-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-60-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Rainbow Fluorescent Particles

RFP-70-5 Spherotech 5 mL 376.8 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles

URFP-02-2 Spherotech 2 mL 358.8 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles

URFP-05-2 Spherotech 2 mL 358.8 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles

URFP-10-5 Spherotech 5 mL 358.8 EUR

Supra Rainbow Fluorescent Particles

SRCP-35-2A Spherotech 2X1 mL 346.8 EUR

Supra Rainbow Fluorescent Particles

SRCP-35-5A Spherotech 5X1 mL 700.8 EUR

Supra Rainbow Fluorescent Particles

SRCP01-35--10A Spherotech 10X1 mL 194.4 EUR

Supra Rainbow Fluorescent Particles

SRCP01-35--2AK Spherotech 2X1 mL 486 EUR

Supra Rainbow Fluorescent Particles

SRCP10-35--2A Spherotech 2X1 mL 1497.6 EUR

AccuCount Rainbow Fluorescent Particles

ACRFL-100-3 Spherotech 3 mL 254.4 EUR

AccuCount Rainbow Fluorescent Particles

ACRFP-100-3 Spherotech 3 mL 254.4 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles ~3.8µm

BLI610A-1 Polysciences Europe GmbH 1ml 265 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles ~3.8µm

BLI610B-5 Polysciences Europe GmbH 5ml 522 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles ~3.8µm

BLI610C-14 Polysciences Europe GmbH 2x7ml 1007 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles ~10.2µm

BLI611A-1 Polysciences Europe GmbH 1ml 265 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles ~10.2µm

BLI611B-5 Polysciences Europe GmbH 5ml 522 EUR

Ultra Rainbow Fluorescent Particles ~10.2µm

BLI611C-14 Polysciences Europe GmbH 2x7ml 1007 EUR

UltraRainbow Calibration Particle Kit

URCP-100-6K Spherotech 6x1 mL 1321.2 EUR

UltraRainbow Calibration Particle Kit

URCP-38-20K Spherotech 1x20 mL (fluorescent) 2496 EUR

UltraRainbow Calibration Particle Kit

URCP-38-2K Spherotech 1x2 mL (fluorescent) 364.8 EUR

UltraRainbow Calibration Particle Kit

URCP-50-2K Spherotech 1x2 mL (fluorescent) 372 EUR

AccuCount Ultra Rainbow Fluorescent Particles

ACURFP-38-15 Spherotech 15 mL 535.2 EUR

AccuCount Ultra Rainbow Fluorescent Particles

ACURFP-38-5 Spherotech 5 mL 249.6 EUR

AccuCount Ultra Rainbow Fluorescent Particles

ACURFP-50-10 Spherotech 10 mL 364.8 EUR

Calibration Kit

GAS1322 Scientific Laboratory Supplies EACH 1071.6 EUR

Blank Calibration

BCP-10-5 Spherotech 5 mL 218.4 EUR

PE Calibration Kit

ECFP-F2-5K Spherotech 5X1 mL 372 EUR

GFP Calibration Kit

ECFP-F9-6K Spherotech 6x1 mL 376.8 EUR

FITC Calibration Kit

ECFP-F1-5K Spherotech 5X1 mL 372 EUR

Calibration key HI904

TIT1076 Scientific Laboratory Supplies EACH 64.8 EUR

Calibration Certificate

FLO1052 Scientific Laboratory Supplies EACH 111.6 EUR

Calibration Weight 100g

BAL4728 Scientific Laboratory Supplies EACH 158.4 EUR

Calibration Mass 1g E2

BAL1700 Scientific Laboratory Supplies EACH 120 EUR

Calibration Mass 2g E2

BAL1702 Scientific Laboratory Supplies EACH 120 EUR

Calibration Mass 5g E2

BAL1704 Scientific Laboratory Supplies EACH 127.2 EUR

Calibration Mass Calibrated 1g E2

BAL1722 Scientific Laboratory Supplies EACH 145.2 EUR

Calibration Mass Calibrated 2g E2

BAL1724 Scientific Laboratory Supplies EACH 134.4 EUR

Calibration Mass Calibrated 5g E2

BAL1726 Scientific Laboratory Supplies EACH 148.8 EUR

Calibration Mass Calibrated 1g F1

BAL1776 Scientific Laboratory Supplies EACH 75.6 EUR

Calibration Mass Calibrated 2g F1

BAL1778 Scientific Laboratory Supplies EACH 98.4 EUR

Calibration Mass Calibrated 5g F1

BAL1780 Scientific Laboratory Supplies EACH 91.2 EUR

Calibration Mass 10g E2

BAL1706 Scientific Laboratory Supplies EACH 135.6 EUR

Calibration Mass 20g E2

BAL1708 Scientific Laboratory Supplies EACH 154.8 EUR

Calibration Mass 50g E2

BAL1710 Scientific Laboratory Supplies EACH 144 EUR

Calibration Mass 100g E2

BAL1712 Scientific Laboratory Supplies EACH 158.4 EUR

Calibration Mass 200g E2

BAL1714 Scientific Laboratory Supplies EACH 204 EUR

Calibration Mass 500g E2

BAL1716 Scientific Laboratory Supplies EACH 384 EUR

Calibration Mass 1kg E2

BAL1718 Scientific Laboratory Supplies EACH 562.8 EUR

Calibration Mass 2kg E2

BAL1720 Scientific Laboratory Supplies EACH 865.2 EUR

Calibration Kit For 2100N

WAT3662 Scientific Laboratory Supplies 1KIT 586.8 EUR

Calibration Mass Calibrated 10g E2

BAL1728 Scientific Laboratory Supplies EACH 154.8 EUR

Calibration Mass Calibrated 20g E2

BAL1730 Scientific Laboratory Supplies EACH 186 EUR

Calibration Mass Calibrated 50g E2

BAL1732 Scientific Laboratory Supplies EACH 166.8 EUR

Calibration Mass Calibrated 100g E2

BAL1734 Scientific Laboratory Supplies EACH 187.2 EUR

Calibration Mass Calibrated 200g E2

BAL1736 Scientific Laboratory Supplies EACH 237.6 EUR

Calibration Mass Calibrated 500g E2

BAL1738 Scientific Laboratory Supplies EACH 330 EUR

Calibration Mass Calibrated 1kg E2

BAL1740 Scientific Laboratory Supplies EACH 548.4 EUR

Calibration Mass Calibrated 2kg E2

BAL1742 Scientific Laboratory Supplies EACH 830.4 EUR

Zgodność z teorią Mie była doskonała w kierunku rozproszenia do przodu. Jednak  nie zaobserwowano oscylacji o małej amplitudzie w pobliżu obszarów tęczy , korzystając z liczbowych danych metodycznych z cząstek sferoidalnych i cząstek  półkulistych   . Omówiono zastosowanie cząstek półkulistych   jako  wzorca kalibracyjnego  dla optycznych przyrządów do określania wielkości cząstek typu intensywności  .

 

 

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *