Białko hamujące fosfolipazę A2 w granulocytach obojętnochłonnych królika indukowane przez glikokortykoidy

Gdy królicze  neutrofile otrzewnowe leczono glikokortykoidami, ich odpowiedź chemotaktyczna na stymulację przez chemoatraktant fMet-Leu-Phe była znacznie zmniejszona.

Wstępna inkubacja komórek z glukokortykoidami również zmniejszyła aktywność fosfolipazy A2 (2-acylohydrolazy fosfatydowej, EC 3.1.1.4) in situ, co zmierzono przez uwalnianie kwasu [1-14C]arachidonowego, który wcześniej wbudowywał d do fosfolipidów. Moc hamująca glukokortykoidów na aktywność fosfolipazy A2 dobrze korelowała z ich działaniem przeciwzapalnym i ich zdolnością do wiązania się z receptorami glukokortykoidowymi.

Inhibitory syntezy RNA i białek tłumiły hamujący wpływ glikokortykoidów na aktywność fosfolipazy A2. Trawienie komórek traktowanych glikokortykoidem przez Pronase przezwyciężyło działanie hamujące. Traktowanie Pronazą nie miało wpływu na aktywność fosfolipazy A2 indukowaną przez jonofor Ca2+ A23187. Filtracja żelowa białek z błon neutrofili znakowanych [3H] lizyną  wykazała indukcję białka (około 40 000 daltonów) po leczeniu glikokortykoidami. Białko to hamowało częściowo oczyszczoną fosfolipazę trzustkową A2 i zmniejszało zapoczątkowaną przez peptyd odpowiedź chemotaktyczną granulocytów obojętnochłonnych.

 Zmiany miażdżycowe u królików i ludzi zawierają IgG, które rozpoznają epitopy utlenionego LDL.

Zmiany miażdżycowe zawierają stosunkowo duże ilości IgG. Wcześniej wykazaliśmy, że zarówno surowice ludzkie, jak i królicze zawierają autoprzeciwciała przeciwko epitopom utlenionej (Ox) lipoproteiny o małej gęstości (LDL) i że LDL wyizolowany ze zmian miażdżycowych zawiera niewielkie ilości ściśle związanej IgG.

Nie wiadomo jednak, czy IgG wyizolowane ze zmian miażdżycowych rozpoznaje epitopy obecne w natywnym LDL lub Ox-LDL. IgG wyizolowano z dziedzicznych hiperlipidemicznych zmian miażdżycowych królika (WHHL) Watanabe przez kolejne ekstrakcje solą, oczyszczono metodą szybkiej chromatografii cieczowej białka na białku G i zastosowano w teście radioimmunologicznym w fazie stałej.

IgG i kompleksy immunologiczne wyizolowano również z ekstraktów solankowych ludzkich zmian poprzez adsorpcję na kulkach lateksowych pokrytych przeciwciałami anty-ludzkimi IgG lub białkiem A. IgG wyizolowane ze zmian króliczych wykazywały znaczące miana przeciwko LDL modyfikowanym dialdehydem malonowym (MDA) i utlenianym przez jony miedzi przez 4 i 18 godzin, ale nie przeciwko natywnemu LDL.

Na Western blot, zmiany IgG barwiły MDA-LDL i fragmenty Ox-LDL. Western blot kompleksów immunologicznych izolowanych z ludzkich zmian chorobowych ujawnił obecność w izolowanych kompleksach zarówno fragmentów apoproteiny B, jak i apoproteiny B, które reagowały z przeciwciałami przeciwko MDA-lizynie.

Ponadto, epitopy Ox-LDL wybarwione immunologicznie IgG królika obecne w ludzkich zmianach miażdżycowych. Immunobarwienie otrzymane z IgG z króliczych zmian były podobne do tych otrzymanych z przeciwciałem monoklonalnym specyficznym dla MDA-lizyny. Wyniki pokazują, że zmiany miażdżycowe u ludzi i królików zawierają IgG, które rozpoznają epitopy charakterystyczne dla Ox-LDL. Dane te sugerują, że procesy immunologiczne mogą być ważnym elementem procesu miażdżycowego.

Funkcja nośnika w  antyhaptenowych odpowiedziach immunologicznych. I. Wzmocnienie pierwotnych i wtórnych  odpowiedzi przeciwciał przeciw haptenom  przez preimmunizację nosicielem.

Wstępna immunizacja świnek morskich lub  królików  na bydlęcą gamma globulinę (BGG) przygotowuje zwierzęta do znacznie wzmocnionych  odpowiedzi przeciwciał na 2,4-dinitrofenylo-BGG (DNP-BGG).

Zjawisko to jest obserwowane zarówno w pierwotnej  odpowiedzi przeciwciał anty – DNP  na DNP-BGG, jak i wtórnej  odpowiedzi przeciwciał anty – DNP  na DNP-BGG u zwierząt szczepionych DNP-owoalbuminą (DNP-OVA). Wstępna immunizacja BGG jest najskuteczniejsza, jeśli  antygen podaje się w postaci kompletnej emulsji adiuwantowej Freunda; u  królików dawka 1 mikrog BGG jest bardziej skuteczna niż dawka 50 mikrog, podczas gdy u świnek morskich jest odwrotnie.

Transfuzja homologicznych  surowic  anty -BGG nie zastępuje aktywnej immunizacji BGG w przygotowaniu zwierząt do tych wzmocnionych odpowiedzi przeciwciał anty -DNP  .

Zarówno klasa immunoglobulin, jak i średnia stała asocjacji dla epsilon-DNP-L- lizyna  przeciwciała  anty -DNP wytwarzanego w tych wzmocnionych odpowiedziach są określone przez tryb i czas immunizacji koniugatami haptenowymi  i nie ma na nie znaczącego wpływu charakter preimmunizacja nosiciela.

Badania te wskazują, że specyficzność anamnestycznych odpowiedzi przeciwciał swoistych dla haptenu wobec nośnika  jest w dużej mierze spowodowana interakcją dwóch niezależnych jednostek rozpoznających związanych z komórką, jednej wyspecjalizowanej w nosicielstwie, a drugiej swoistej dla determinant haptenowych.

Badania mechanizmu powstawania antygenu penicyliny. III. Grupa N-(D-alfa-benzylopenicilloil) jako determinanta antygenowa odpowiedzialna za nadwrażliwość na penicylinę G.

Nadmiar kwasu D-benzylopenicylenowego (BPE) poddano reakcji z ludzką gamma-globuliną, albuminą surowicy ludzkiej, żelatyną i poli-L- lizyną  w roztworze wodnym buforowanym o pH 7,5-8,0.

W tych warunkach BPE reagował głównie z   grupami epsilon-aminowymi lizyny białek, tworząc mieszaninę diastereoizomerów grup epsilon-N-(D-alfa-benzylopenicyloilo) -lizynowych  (Di-BPO-Lys). BPE reagował również, ale w znacznie mniejszym stopniu, z wiązaniami dwusiarczkowymi cystyny ​​ludzkiej gamma-globuliny i albuminy surowicy ludzkiej, tworząc mieszane grupy dwusiarczkowe kwas D-benzylopenicylenowy-cysteina (BPE-SS-Cys). Koniugaty zawierające dużą liczbę mieszanych grup dwusiarczkowych BPE lub D-penicylaminowych wytworzono w reakcji BPE lub D-penicylaminowej z tiolowaną ludzką gamma-globuliną w łagodnych warunkach utleniających.

Przeciwciała przeciw penicylinie  wytworzono u  królików  przez immunizację penicyliną potasową G (PG) lub wstępnie inkubowaną mieszaniną PG z normalną  surowicą królika  (PG-NRS) w kompletnym adiuwancie Freunda. Analizy specyficznego wytrącania w środowisku wodnym i żelowym (Ouchterlony), analizy PCA i specyficzne hamowanie tych reakcji za pomocą haptenów przeprowadzono na  króliczych surowicach  anty -PG i  anty- (PG-NRS), stosując powyższe koniugaty jako  antygeny .

Stwierdzono  , że przeciwciała przeciw penicylinie  są skierowane przeciwko diastereomerycznej mieszaninie grup N-(D-alfa-benzylopenicyloilowych), głównie grup Di-BPO-Lys. Za pomocą tych technik nie wykryto żadnych  przeciwciał skierowanych przeciwko grupom disiarczkowym mieszanym z BPE lub mieszanym grupom disiarczkowym D-penicylamina.

Trzech z sześciu pacjentów z historią reakcji alergicznych na PG odpowiedziało reakcjami bąbla i rumienia na grupy N-(D-alfa-benzylopenicyloilowe) (BPO) zawarte w koniugacie BPE-globulina ludzka.

Inny taki pacjent wykazywał  przeciwciała w surowicy specyficzne dla grupy BPO. Jeden pacjent leczony 25 gm dziennie PG wykazał obecność niedializowalnych  koniugatów antygenowych BPO w jego surowicy. Wyniki te pokazują, że diastereomeryczne grupy BPO (głównie grupy Di-BPO-Lys) są głównymi  determinantami antygenowymi odpowiedzialnymi za nadwrażliwość na PG u  królików  i ludzi. Omówiono możliwą przydatność kliniczną wielowartościowych koniugatów Di-BPO i jednowartościowych haptenów Di-BPO.

Immunofluorescencja wazopresyny i oksytocyny w szczurzym układzie podwzgórzowo-neurohypophypopseal.

Niniejsza praca dotyczy opracowania procedury immunofluorescencji umożliwiającej swoistą lokalizację wazopresyny i oksytocyny w układzie podwzgórzowo-neuroprzysadkowym (hnx) szczura. Przeciwciała przeciwko wazopresynie argininowej (AVP),  lizyno -wazopresynie (LVP) i oksytocynie uzyskano poprzez wstrzyknięcie  królikom tych hormonów, które były kowalencyjnie związane z tyreoglobuliną .

U królików immunizowanych wazopresyną   występowały okresy moczówki prostej, podczas gdy badanie histologiczne „hns” wykazało nienaruszony układ neurosekrecyjny z oznakami zwiększonej syntezy endogennych hormonów w jądrze nadwzrokowym i zwiększonego uwalniania w nerwowo-przysadce mózgowej niektórych  królików .

Dzienne spożycie wody przez  króliki immunizowane oksytocyną było podobne do spożycia królików  kontrolnych  . Rozwój  przeciwciał przeciwko wazopresynie, mierzony w procedurze immunofluorescencji, wykazywał przebieg znacznie odmienny od krzywej miana oznaczonej testem radioimmunologicznym (RIA). Stwierdzono również, że specyficzność  przeciwciał stosowanych w procedurze immunofluorescencji różni się znacznie od ich specyficzności w systemie RIA. Dlatego należy zbadać moc i specyficzność  przeciwciał w ramach samej procedury immunofluorescencji.

Stosując świeżo mrożone hipotalami lub przysadki utrwalone acetonem, nie można było uzyskać ostrej lokalizacji immunofluorescencji w HNS. Dlatego dokonano prefiksacji. Zarówno rodzaj, jak i czas trwania prefiksacji ujawniły zupełnie inne wyniki dotyczące immunofluorescencji w komórkach neurosekrecyjnych w podwzgórzu i ich zakończeń w neuroprzysadce.

Najlepsze wyniki immunofluorescencji uzyskano stosując 6-godzinną prefiksację glioksalem dla podwzgórza i 24-godzinną prefiksację formaliną dla przysadki. Reakcja krzyżowa  przeciwciał przeciw oksytocynie lub wazopresynie została przetestowana na syntetycznych hormonach, które były związane z kulkami agarozowymi aktywowanymi CNBR i osadzonymi na szklanych bokach. Wszystkie  anty -osocze wykazywały reakcję krzyżową na kulkach zawierających antygen  heterologiczny .

Osocze oczyszczono przez inkubację z perełkami zawierającymi hormon heterologiczny aż do usunięcia składnika reagującego krzyżowo. Stosując oczyszczone  przeciwciała zbadano dystrybucję komórek oksytocyny i wazopresyny w obrębie HNS.

Rabbit Polyclonal antibody Anti-CRBN

Anti-CRBN ImmunoStep 50 µg 349 EUR

Dimethyl-Lysine Rabbit pAb

A17323-100ul Abclonal 100 ul 384 EUR

Dimethyl-Lysine Rabbit pAb

A17323-200ul Abclonal 200 ul 554 EUR

Dimethyl-Lysine Rabbit pAb

A17323-20ul Abclonal 20 ul Ask for price

Dimethyl-Lysine Rabbit pAb

A17323-50ul Abclonal 50 ul 265 EUR

Acetyl Lysine Rabbit pAb

ABD7729 Lifescience Market 100 ug 438 EUR

Pan DiMethyl-lysine Rabbit pAb

A5870-100ul Abclonal 100 ul 459 EUR

Pan DiMethyl-lysine Rabbit pAb

A5870-200ul Abclonal 200 ul 686 EUR

Pan DiMethyl-lysine Rabbit pAb

A5870-20ul Abclonal 20 ul 183 EUR

Pan DiMethyl-lysine Rabbit pAb

A5870-50ul Abclonal 50 ul 308 EUR

Pan Acetyl-Lysine Rabbit pAb

A2391-100ul Abclonal 100 ul 384 EUR

Pan Acetyl-Lysine Rabbit pAb

A2391-200ul Abclonal 200 ul 554 EUR

Pan Acetyl-Lysine Rabbit pAb

A2391-20ul Abclonal 20 ul 183 EUR

Pan Acetyl-Lysine Rabbit pAb

A2391-50ul Abclonal 50 ul 265 EUR

pan-TriMethyl-lysine Rabbit pAb

A18292-100ul Abclonal 100 ul 384 EUR

pan-TriMethyl-lysine Rabbit pAb

A18292-20ul Abclonal 20 ul 183 EUR

pan-TriMethyl-lysine Rabbit pAb

A18292-200ul Abclonal 200 ul 554 EUR

pan-TriMethyl-lysine Rabbit pAb

A18292-50ul Abclonal 50 ul 265 EUR

Pan Methylated Lysine Rabbit pAb

ABD7728 Lifescience Market 100 ug 438 EUR

Pan Acetyl-Lysine pAb

30416-100ul SAB 100ul 252 EUR

Pan Acetyl-Lysine pAb

30416-50ul SAB 50ul 187 EUR

Pan DiMethyl-lysine pAb

30669-100ul SAB 100ul 252 EUR

Pan DiMethyl-lysine pAb

30669-50ul SAB 50ul 187 EUR

Rabbit Anti-Carbamyl-Lysine (CBL) Polyclonal Antibody

STA-078 Cell Biolabs 50 µg 409 EUR

Rabbit Lysine ELISA kit

E04L0304-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Rabbit Lysine ELISA kit

E04L0304-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Rabbit Lysine ELISA kit

E04L0304-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Polyclonal Goat anti-GST α-form

GST-ANTI-1 Detroit R&D 50 uL 280 EUR

Polyclonal Goat anti-GST μ-form

GST-ANTI-2 Detroit R&D 50 uL 280 EUR

Polyclonal Goat anti-GST p-form

GST-ANTI-3 Detroit R&D 50 uL 280 EUR

Anti-Dimethyl-Lysine antibody

STJ119453 St John's Laboratory 100 µl 393 EUR

Anti-Acetyl Lysine antibody

STJ97181 St John's Laboratory 200 µl 197 EUR

Anti-Acetyl Lysine antibody

STJ97466 St John's Laboratory 200 µl 197 EUR

Anti-Acetyl Lysine antibody

STJ90135 St John's Laboratory 200 µl 197 EUR

Rabbit anti-LukA pAb

0316-001 IBT Bioservices 100ug 354 EUR

Rabbit anti-LukB pAb

0317-001 IBT Bioservices 100ug 354 EUR

Rabbit anti-Junin pAb

04-0006 IBT Bioservices 500ug 257 EUR

Rabbit anti-Hla pAb

04-0010 IBT Bioservices 500ug 303 EUR

Acetyl-Lysine Rabbit Polyclonal Antibody

HW092-100ul SAB 100ul 252 EUR

Rabbit Hexanoyl lysine ELISA kit

E04H0333-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Rabbit Hexanoyl lysine ELISA kit

E04H0333-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Rabbit Hexanoyl lysine ELISA kit

E04H0333-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Rabbit Carboxymethyl lysine ELISA kit

E04C0773-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR

Rabbit Carboxymethyl lysine ELISA kit

E04C0773-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR

Rabbit Carboxymethyl lysine ELISA kit

E04C0773-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR

Anti-pan-TriMethyl-lysine antibody

STJ11100248 St John's Laboratory 100 µl 393 EUR

Anti-Pan Methyl Lysine antibody

STJ97129 St John's Laboratory 200 µl 197 EUR

Anti-Pan Methylated Lysine antibody

STJ97446 St John's Laboratory 200 µl 197 EUR

Rabbit anti-EBOV VP40 pAb

0301-010 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EBOV NP pAb

0301-012 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EBOV GP pAb

0301-015 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EBOV VP35 pAb

0301-040 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EBOV VP24 pAb

0301-046 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EBOV VP24 pAb

0301-047 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EBOV VP30 pAb

0301-048 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-SUDV VP40 pAb

0302-001 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-SUDV NP pAb

0302-012 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-SUDV GP pAb

0302-020 IBT Bioservices 500ug 481 EUR

Rabbit anti-SUDV sGP pAb

0302-030 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-MARV VP40 pAb

0303-001 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-MARV GP pAb

0303-007 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-MARV GP pAb

0303-007-bio IBT Bioservices 100ug 608 EUR

Rabbit anti-MARV NP pAb

0303-012 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-BDBV GP pAb

0304-001 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-RESTV GP pAb

0305-001 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-CHIKV E2 pAb

0306-001 IBT Bioservices 100ug 506 EUR

Rabbit anti-LASV GP pAb

0307-001 IBT Bioservices 100ug 476 EUR

Rabbit anti-LASV V pAb

0307-002 IBT Bioservices 100ug 476 EUR

Rabbit anti-ZIKA GP pAb

0308-001 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-ZIKA NS1 pAb

0308-002 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-LukF-PV pAb

0312-002 IBT Bioservices 500ug 354 EUR

Rabbit anti-LukAB pAb (neutralizing)

0313-001 IBT Bioservices 500ug 405 EUR

Rabbit anti-Hlg B pAb

0314-001 IBT Bioservices 500ug 354 EUR

Rabbit anti-Hlg C pAb

0314-002 IBT Bioservices 500ug 354 EUR

Rabbit anti-EBOV VLP pAb

0315-001 IBT Bioservices 500ug 481 EUR

Rabbit anti-MARV VLP pAb

04-0005 IBT Bioservices 500ug 253 EUR

Rabbit anti-Chikungunya (CHIKV) pAb

04-0008 IBT Bioservices 500ug 293 EUR

Rabbit anti-LukS-PV pAb

04-0009 IBT Bioservices 500ug 354 EUR

anti-HCV NS5a rabbit pAb

199-A-01mg Virogen 0,1 mg 267.5 EUR

anti-HCV NS5a rabbit pAb

199-A-1000ug Virogen 1000 ug 1282.5 EUR

anti-HCV NS5b rabbit pAb

266-A-01mg Virogen 0,1 mg 267.5 EUR

anti-HCV NS5b rabbit pAb

266-A-1000ug Virogen 1000 ug 1282.5 EUR

Rabbit anti DDDDK-Tag pAb

AE004 Abclonal 50 ul 195 EUR

Rabbit anti GST-Tag pAb

AE006 Abclonal 100 ul 195 EUR

Rabbit anti GFP-Tag pAb

AE011 Abclonal 50 ul 176 EUR

Rabbit anti V5-Tag pAb

AE022 Abclonal 50 ul 256 EUR

Rabbit anti HA-Tag pAb

AE036 Abclonal 100 ul 308 EUR

Rabbit anti His-Tag pAb

AE068 Abclonal 50 ul 195 EUR

pAb rabbit anti-human EPO

CT282 U-CyTech 0.5 mg 184 EUR

Rabbit Anti-Human With-No-Lysine Kinase-1 (WNK1) antiserum

WNK11-S Alpha Diagnostics 100 ul 457 EUR

Rabbit Anti-Human With-No-Lysine Kinase-2 (WNK2) antiserum

WNK21-S Alpha Diagnostics 100 ul 457 EUR

Rabbit Anti-Human With-No-Lysine Kinase-3 (WNK3) antiserum

WNK31-S Alpha Diagnostics 100 ul 457 EUR

Rabbit Anti-Human With-No-Lysine Kinase-4 (WNK4) antiserum

WNK41-S Alpha Diagnostics 100 ul 457 EUR

Anti-E.coli HCP

F117-PAB Cygnus Technologies 1 ml 912 EUR

Anti-Panpan-Kme2-(DiMethyl-lysine) antibody

STJ27698 St John's Laboratory 100 µl 457 EUR

Anti-PanPan-Kac-(Acetyl-Lysine) antibody

STJ111149 St John's Laboratory 100 µl 393 EUR

Rabbit Anti-Human Lysine-specific demethylase 5B (KDM5B) IgG (aff pure)

AB-23269-A Alpha Diagnostics 100ug 482 EUR

Rabbit anti-EBOV GP pAb Biotinylated

0301-015-bio IBT Bioservices 100ug 608 EUR

Rabbit anti-EBOV L-Polymerase pAb

0301-045 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

Rabbit anti-EEEV E2 GP pAb

0318-001 IBT Bioservices 100ug 481 EUR

 

 

Więcej komórek zawierających oksytocynę było zlokalizowanych w części dziobowej, a więcej wazopresyny w części ogonowej zarówno jądra nadwzrokowego (SON), jak i przykomorowego (PVN). Porównywalne odsetki komórek zawierających oksytocynę i wazopresynę stwierdzono w SON i PVN. Bezwzględna ilość komórek zawierających oksytocynę była 2,5 razy większa w SON niż w PVN, co wydaje się przeczyć „klasycznemu” poglądowi, że PVN głównie lub całkowicie syntetyzuje oksytocynę. Ponadto, fluorescencję stwierdzono przy użyciu przeciwciał przeciwko wazopresynie w jądrze nadskrzyżowaniowym u szczurów Wistar i heterozygotycznych szczurów Brattleboro, ale nie w tym jądrze homozygotycznych Brattleboro.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.