System replikacji DNA adenowirusa Rt pcrAn in vitro katalizował tworzenie kowalencyjnego kompleksu między białkiem o długości 80 000 daltonów i 5′-dCMP w obecności DNA [alfa-32P-dCTP, MgCl2, ATP i adenowirusa (Ad) z białkiem kowalencyjnie związany z końcem 5′ każdej nici (prot DNA Ad).
Wymagania dotyczące prot DNA Ad w tej reakcji były podobne do wymagań replikacji DNA in vitro. Gdy dATP, dTTP i ddGTP 2′,3′-dideoksynukleozydotrifosforan (ddNTP) zostały włączone do mieszaniny reakcyjnej, wykryto wydłużony kompleks, który składał się z białka o długości 80 000 daltonów związanego z 26-zasadowym oligonukleotydem.
Tworzenie wydłużonego produktu, ale nie kompleksu białko-dCMP, było hamowane przez ddATP , ddCTP lub ddTTP. Wymagania dotyczące tworzenia kompleksu białko-dCMP, charakter wiązania między białkiem a dCMP, wielkość białka oraz istnienie wydłużonych form wskazywały, że białko związane z kompleksem było identyczne z terminalem Ad o długości 80 000 daltonów białko znalezione na replikujących się cząsteczkach DNA, jak opisano w Challberg et al. [Challberg, MD, Desiderio, SV & Kelly, TJ, Jr. (1980) Proc. Natl. Acad. Nauka. USA 77, 5105-5109].
Różnicowa fosforylacja azydotymidyny, dideoksycytydyny i dideoksyinozyny w spoczynkowych i aktywowanych jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej.
Aktywność przeciwwirusową azydotymidyny (AZT), dideoksycytydyny (ddC) i dideoksyinozyny (ddI) wobec HIV-1 oceniono porównawczo w PBM stymulowanym PHA.
Średnie stężenie leku, które dało 50% hodowli ujemnych pod względem p24 Gag było zasadniczo różne: 0,06, 0,2 i 6 mikroM odpowiednio dla AZT, ddC i ddI. Odkryliśmy, że AZT była preferencyjnie fosforylowana do postaci trifosforanu (TP) w PHA-PBM, a nie niestymulowanym, spoczynkowym PBM (R-PBM), wytwarzając 10- do 17-krotnie wyższy stosunek AZTTP/dTTP w PHA-PBM niż w R -PBM.
Fosforylacja ddC i ddI do ich form TP była jednak znacznie mniej wydajna w PHA-PBM, co skutkowało około 5-krotnie i około 15-krotnie niższymi stosunkami odpowiednio ddCTP/dCTP i ddATP /dATP w PHA-PBM niż w R-PBM .
Zbadano kolejność porównawczą indukowanego przez PHA wzrostu aktywności enzymów komórkowych: kinaza tymidynowa>>kinaza urydynowa>>kinaza deoksycytydynowa>>kinaza adenozynowa>> 5′-nukleotydaza.
Wnioskujemy, że AZT, ddC i ddI wywierają nieproporcjonalne działanie przeciwwirusowe w zależności od stanu aktywacji komórek docelowych, tj. ddI i ddC wywierają działanie przeciwwirusowe korzystniej w komórkach w spoczynku niż w komórkach aktywowanych, podczas gdy AZT preferencyjnie chroni aktywowane komórki przed zakażeniem HIV . Biorąc pod uwagę, że synteza prowirusowego DNA wirusa HIV-1 w spoczynkowych limfocytach rozpoczyna się na poziomach porównywalnych z aktywowanymi limfocytami, obecne dane powinny mieć praktyczne znaczenie w projektowaniu chemioterapii przeciw HIV, zwłaszcza chemioterapii skojarzonej.
Polimeryzacja z obejściem adduktu DNA przez polimerazę DNA Dpo4 Sulfolobus solfataricus: analiza i struktury krystaliczne produktów podstawienia wielu par zasad i przesunięcia ramki z adduktem 1,N2-etenoguaniną.
- ,N(2)-Etheno(epsilon)guanina jest mutagenną zmianą DNA pochodzącą z produktów utleniania lipidów, a także z niektórych chemicznych czynników rakotwórczych. Analiza elektroforetyczna w żelu produktów wydłużania startera przez polimerazę IV DNA Sulfolobus solfataricus P2 (Dpo4) wykazała preferencyjne włączenie A przeciwnego 3′-(1,N(2)-epsilon-G)TACT-5′, wśród czterech testowanych dNTP indywidualnie. Z matrycą 3′-(1,N(2)-epsilon-G)CACT-5′, zarówno G, jak i A zostały włączone.
- Gdy wydłużanie startera przeprowadzono w obecności mieszaniny wszystkich czterech dNTP, wysokociśnieniowa chromatografia cieczowa-spektrometria masowa produktów wykazała , że (przeciwieństwo 3′-(1,N(2)-epsilon-G)CACT-5′ ) głównym produktem był 5′-GTGA-3′, a drugorzędnym produktem był 5′-AGTGA-3′.
- Na matrycy 3′-(1,N(2)-epsilon-G)TACT-5′, następujące cztery produkty zostały zidentyfikowane za pomocą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej-spektrometrii masowej: 5′-AATGA-3′, 5′-ATTGA -3′, 5′-ATGA-3′ i 5′-TGA-3′. Rentgenowska struktura krystaliczna Dpo4 została rozwiązana (2,1 A) za pomocą szablonu startera i A umieszczonego w starterze tak, aby znajdował się naprzeciwko 1,N(2)-epsilon-G w matrycy 3′-(1,N( 2)-epsilon-G)TAK 5′.
Dodany A w podkładzie został sparowany w poprzek szablonu T z klasyczną geometrią Watsona-Cricka. Podobne struktury zaobserwowano w potrójnym kompleksie Dpo4-DNA-dATP i potrójnym kompleksie Dpo4-DNA- ddATP , z d(d)ATP naprzeciwko matrycy T. Podobną strukturę zaobserwowano z ddGTP sąsiadującym ze starterem i naprzeciwko C obok 1,N(2)-epsilon-G w 3′-(1,N(2)-epsilon-G)CACT-5′. Doszliśmy do wniosku, że Dpo4 wykorzystuje kilka mechanizmów, w tym inkorporację A naprzeciwko 1,N(2)-epsilon-G, a także odmianę niewspółosiowości stabilizowanej przez dNTP, do generowania mutacji zarówno par zasad, jak i przesunięcia ramki.
Identyfikacja nieprocesowej aktywności telomerazy z komórek myszy.
Aktywność telomerazy zidentyfikowano w ekstraktach z kilku różnych mysich linii komórkowych. Dodanie telomerowych powtórzeń TTAGGG było specyficzne dla telomerowych starterów oligonukleotydowych i wrażliwe na wstępne traktowanie RNazą A.
W przeciwieństwie do setek powtórzeń zsyntetyzowanych przez enzymy telomerazy ludzkiej i Tetrahymena in vitro, mysia telomeraza zsyntetyzowała tylko jedno lub dwa powtórzenia TTAGGG na telomerycznych starterach.
Produkty obserwowane po wydłużeniu starterów z sekwencjami permutowanymi kołowo (TTAGGG)3 i po zakończeniu łańcucha ddATP lub ddTTP wskazywały, że mysia telomeraza zatrzymuje się po dodaniu pierwszej reszty dG w sekwencji TTAGGG.
Krótka długość produktów syntetyzowanych przez mysią telomerazę nie była spowodowana dyfuzyjnym inhibitorem w mysim ekstrakcie, ponieważ ludzka telomeraza nadal syntetyzowała długie produkty po zmieszaniu z mysią.
Eksperymenty z prowokacją starterów wykazały, że ludzki enzym syntetyzował długie powtórzenia TTAGGG procesowo in vitro, podczas gdy mysia telomeraza wydawała się być znacznie mniej procesywna. Identyfikacja krótkich produktów reakcji telomerazy w ekstraktach mysich sugeruje, że ekstrakty z innych organizmów również mogą generować tylko krótkie produkty. Wiedza ta może pomóc w identyfikacji aktywności telomerazy w organizmach, których aktywność nie została jeszcze wykryta.
Oporność na 2′,3′-dideoksycytydynę nadaną przez mutację w kodonie 65 odwrotnej transkryptazy ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 1.
Wariant ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 1 oporny na zalcytabinę (2′,3′-dideoksycytydyna [ddC]) został wyselekcjonowany przez kolejne pasaże w obecności wzrastających stężeń ddC w hodowlach komórek jednojądrzastych krwi obwodowej.
Mutacja powodująca podstawienie lizyny do argininy została zauważona w kodonie 65 odwrotnej transkryptazy (RT) tego wirusa selekcjonowanego pod względem ddC. Sklonowany zmutowany wirus z tą mutacją kodonu 65 został skonstruowany przy użyciu nowego podejścia PCR do ukierunkowanej mutagenezy.
Charakterystyka tego wirusa potwierdziła, że podstawienie RT Lys-65->>Arg było konieczne i wystarczające do czterokrotnego wzrostu stężenia hamującego ddC 50%, a także oporności na didanozynę (2′,3′-dideoksyinozynę [ddI]). ). Lys-65->>Arg i oporność wirusa na ddC i ddI również rozwinęła się podczas terapii w izolatach od jednego pacjenta leczonego ddC i dwóch pacjentów leczonych ddI.
DNA Polymerase |
|||
ABF5235 | Lifescience Market | 100 ug | 525.6 EUR |
DNA Polymerase |
|||
ABD3082 | Lifescience Market | 100 ug | 525.6 EUR |
Inhibitor of DNA Binding 2 Protein |
|||
20-abx261029 | Abbexa |
|
|
Inhibitor of DNA Binding 1 Protein |
|||
20-abx262603 | Abbexa |
|
|
DNA polymerase ? (Rat) |
|||
10-101 | Sceti | 20ug | 465.6 EUR |
DNA polymerase ? (Rat) |
|||
10-102 | Sceti | 100ug | 1107.6 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
BA00103 | Cusabio | 500U | 104.4 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
BA00104 | Bioatlas | 1000U | 147.6 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
BA00105 | Bioatlas | 2500U | 278.4 EUR |
HotTaq DNA Polymerase |
|||
BA00203 | Bioatlas | 500U | 174 EUR |
HotTaq DNA Polymerase |
|||
BA00204 | Bioatlas | 1000U | 286.8 EUR |
HotTaq DNA Polymerase |
|||
BA00205 | Bioatlas | 2500U | 626.4 EUR |
RedTaq DNA Polymerase |
|||
BA00303 | Bioatlas | 500U | 147.6 EUR |
RedTaq DNA Polymerase |
|||
BA00304 | Bioatlas | 1000U | 235.2 EUR |
RedTaq DNA Polymerase |
|||
BA00305 | Bioatlas | 2500U | 495.6 EUR |
Pfu DNA Polymerase |
|||
BA00503 | Bioatlas | 500U | 174 EUR |
Pfu DNA Polymerase |
|||
BA00504 | Bioatlas | 1000U | 286.8 EUR |
Pfu DNA Polymerase |
|||
BA00505 | Bioatlas | 2500U | 626.4 EUR |
BIOTAQ DNA Polymerase |
|||
BIO-21040 | Bioline | 500 Units | Ask for price |
IMMOLASE DNA Polymerase |
|||
BIO-21046 | Bioline | 250 Units | Ask for price |
IMMOLASE DNA Polymerase |
|||
BIO-21047 | Bioline | 500 Units | Ask for price |
IMMOLASE DNA Polymerase |
|||
BIO-21048 | Bioline | 5000 Units | Ask for price |
ACCUZYME DNA Polymerase |
|||
BIO-21051 | Bioline | 250 Units | Ask for price |
ACCUZYME DNA Polymerase |
|||
BIO-21052 | Bioline | 500 Units | Ask for price |
BIOTAQ DNA Polymerase |
|||
BIO-21060 | Bioline | 2500 Units | Ask for price |
MangoTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21078 | Bioline | 5000 Units | Ask for price |
MangoTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21082 | Bioline | 2000 Units | Ask for price |
MangoTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21083 | Bioline | 1000 Units | Ask for price |
VELOCITY DNA Polymerase |
|||
BIO-21098 | Bioline | 250 Units | Ask for price |
VELOCITY DNA Polymerase |
|||
BIO-21099 | Bioline | 500 Units | Ask for price |
MyTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21105 | Bioline | 500 units | Ask for price |
MyTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21105/S | Bioline | Sample | Ask for price |
MyTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21106 | Bioline | 2500 units | Ask for price |
MyTaq DNA Polymerase |
|||
BIO-21107 | Bioline | 5000 units | Ask for price |
MyFi DNA Polymerase |
|||
BIO-21117 | Bioline | 250 Units | Ask for price |
MyFi DNA Polymerase |
|||
BIO-21117/S | Bioline | Sample | Ask for price |
MyFi DNA Polymerase |
|||
BIO-21118 | Bioline | 500 Units | Ask for price |
MyFi DNA Polymerase |
|||
BIO-21119 | Bioline | 2500 Units | Ask for price |
Ranger DNA Polymerase |
|||
BIO-21121 | Bioline | 250 Units | Ask for price |
Ranger DNA Polymerase |
|||
BIO-21121/S | Bioline | Sample | Ask for price |
Ranger DNA Polymerase |
|||
BIO-21122 | Bioline | 500 Units | Ask for price |
Taq DNA polymerase |
|||
BT10101 | Bioatlas | 500U | 96 EUR |
Taq DNA polymerase |
|||
BT10102 | Bioatlas | 1000U | 130.8 EUR |
Taq DNA polymerase |
|||
BT10103 | Bioatlas | 2000U | 200.4 EUR |
HotTaq DNA polymerase |
|||
BT10201 | Bioatlas | 500U | 144 EUR |
HotTaq DNA polymerase |
|||
BT10202 | Bioatlas | 1000U | 228 EUR |
T4 DNA Polymerase |
|||
N101-01 | Vazyme | 2000 U | 278.4 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
L7051001 | Biochain | 1000 unit | 234 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
L7051200 | Biochain | 200 unit | 104.4 EUR |
Kodaq DNA Polymerase |
|||
G498 | ABM | 250 U (50 ul) | 104.4 EUR |
Kodaq DNA Polymerase |
|||
G499 | ABM | 1000 U (200 ul) | 189.6 EUR |
AceTaq DNA Polymerase |
|||
P401-d1 | Vazyme | 250 U | 163.2 EUR |
AceTaq DNA Polymerase |
|||
P401-d2 | Vazyme | 1000 U | 272.4 EUR |
AceTaq DNA Polymerase |
|||
P401-d3 | Vazyme | 3000 U | 536.4 EUR |
Pfu DNA Polymerase |
|||
S116 | GeneOn | 1x250 units | 91.2 EUR |
Pfu DNA Polymerase |
|||
S117 | GeneOn | 2x250 units | 112.8 EUR |
Pfu DNA Polymerase |
|||
S118 | GeneOn | 10x250 units | 363.6 EUR |
Bst DNA Polymerase |
|||
S600 | GeneOn | 2000 U | 128.4 EUR |
Ready? DNA Polymerase |
|||
M1146-1000 | Biovision | each | 398.4 EUR |
Ready? DNA Polymerase |
|||
M1146-10000 | Biovision | each | 1279.2 EUR |
Ready? DNA Polymerase |
|||
M1146-5000 | Biovision | each | 960 EUR |
Breeze? DNA Polymerase |
|||
M1148-1000 | Biovision | each | 1246.8 EUR |
Breeze? DNA Polymerase |
|||
M1148-250 | Biovision | each | 464.4 EUR |
Distant? DNA Polymerase |
|||
M1150-1000 | Biovision | each | 823.2 EUR |
Distant? DNA Polymerase |
|||
M1150-250 | Biovision | each | 333.6 EUR |
Advance? DNA Polymerase |
|||
M1151-1000 | Biovision | each | 895.2 EUR |
Advance? DNA Polymerase |
|||
M1151-250 | Biovision | each | 373.2 EUR |
Outstretched? DNA Polymerase |
|||
M1152-1000 | Biovision | each | 960 EUR |
Outstretched? DNA Polymerase |
|||
M1152-250 | Biovision | each | 398.4 EUR |
T4 DNA Polymerase |
|||
M1211-100 | Biovision | each | 385.2 EUR |
Phi29 DNA Polymerase |
|||
M1239-1000 | Biovision | each | 373.2 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
9001-2500 | Biovision | each | 614.4 EUR |
Taq DNA Polymerase |
|||
9001-500 | Biovision | each | 229.2 EUR |
PFU DNA Polymerase |
|||
9003-2500 | Biovision | each | 614.4 EUR |
PFU DNA Polymerase |
|||
9003-500 | Biovision | each | 216 EUR |
Laq? DNA Polymerase |
|||
9004-2500 | Biovision | each | 732 EUR |
Laq? DNA Polymerase |
|||
9004-500 | Biovision | each | 261.6 EUR |
100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT |
|||
M-DNA-100BP | CORNING | 1/pk | 87.6 EUR |
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT |
|||
M-DNA-1KB | CORNING | 1/pk | 84 EUR |
Inhibitor Of DNA Binding 2 (ID2) Antibody |
|||
abx332197-100ul | Abbexa | 100 ul | 510 EUR |
Inhibitor Of DNA Binding 2 (ID2) Antibody |
|||
20-abx241545 | Abbexa |
|
|
Inhibitor Of DNA Binding 2 (ID2) Antibody |
|||
20-abx241669 | Abbexa |
|
|
Inhibitor Of DNA Binding 2 (ID2) Antibody |
|||
20-abx213770 | Abbexa |
|
|
Inhibitor Of DNA Binding 2 (ID2) Antibody |
|||
20-abx213866 | Abbexa |
|
|
ID2 Antibody (Inhibitor of DNA binding 2) |
|||
R32758 | NSJ Bioreagents | 100ug | 419 EUR |
Inhibitor of DNA binding 2 Antibody / ID2 |
|||
RQ6321 | NSJ Bioreagents | 100 ug | 419 EUR |
DNA polymerase gamma antibody |
|||
70R-12532 | Fitzgerald | 100 ul | 548.4 EUR |
Recombinant Pfu DNA Polymerase |
|||
7-03322 | CHI Scientific | 100U | Ask for price |
Recombinant Pfu DNA Polymerase |
|||
7-03323 | CHI Scientific | 500U | Ask for price |
Recombinant Pfu DNA Polymerase |
|||
7-03324 | CHI Scientific | 2500U | Ask for price |
Recombinant Taq DNA Polymerase |
|||
7-03634 | CHI Scientific | 1,000U | Ask for price |
Recombinant Taq DNA Polymerase |
|||
7-03635 | CHI Scientific | 3,000U | Ask for price |
Recombinant Taq DNA Polymerase |
|||
7-03636 | CHI Scientific | 10,000U | Ask for price |
DNA polymerase ? (C-His) |
|||
10-105 | Sceti | 50ug | 637.2 EUR |
DNA Polymerase beta antibody |
|||
70R-50226 | Fitzgerald | 100 ul | 292.8 EUR |
DNA Polymerase lambda antibody |
|||
70R-32186 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
DNA Polymerase zeta antibody |
|||
70R-33711 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
DNA Polymerase zeta antibody |
|||
70R-33727 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
DNA Polymerase theta antibody |
|||
70R-33737 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
DNA Polymerase beta antibody |
|||
70R-31161 | Fitzgerald | 100 ug | 392.4 EUR |
Zmutowany enzym RT kodonu 65 ulegający ekspresji zrekombinowanej był oporny na ddCTP i ddATP w testach bezkomórkowej polimerazy. Wyniki badań zmutowanych enzymów są zgodne z Lys-65->>Arg, co prowadzi do zmian w wiązaniu form trifosforanowych tych analogów nukleozydów do RT. Dane te mają znaczenie dla przyszłych badań nad opornością na ddC, szczególnie tych mających na celu określenie jej znaczenia klinicznego.